产品规格：20次

保存条件：试剂盒于常温运输。长期保存溶液I 2-8℃避光保存，其他组分室温（15-25℃）保存。

包装清单：

 产品简介：

Trizol沉淀蛋白质的方法可有效地除去色素、酚类等干扰电泳的化学物质，特 别是对植物样品中高丰度蛋白——Rubisco1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧 酶（Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase，通常简写为RuBisCO）。采用此方法能够减少高丰度蛋白对2-DE结果的干扰。植物样品中高丰度蛋白（如Rubisco）的存在对其他蛋白质，尤其是低丰度蛋白的检测的影响也很大。适合于植物根、颈、叶等部位蛋白的提取。

 实验前准备：

1. 自备试剂：氯仿、无水乙醇、SDS。

2．使用前若发现溶液I有沉淀，可置于56℃水浴几分钟，即可溶解。

3．第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在溶液II中加入无水乙醇。

4．所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

 使用说明：

1. 取冻存组织加入1ml溶液I(Trizol Reagent)匀浆，样品量不可超过总体积的10%，室温孵育5min，超声粉碎至组织完全溶于液体中；

2. 加入0.2ml氯仿，剧烈晃动15s，室温孵育2-3min，4℃12000×g离心15min；此时溶液分为水相和有机相。

3. 小心吸取并丢弃上层水相（该水相中富含细胞总RNA，用于提取RNA，进行PCR实验）； 

4.在剩下的中间层及有机相中加入0.3ml无水乙醇，颠倒充分混匀后室温放置2-3min，4℃下2000×g离心5min；

5.小心吸取并收集上层有机相（沉淀为DNA），转移到新的离心管中，加入1.5ml异丙醇，轻轻混匀后室温放置10min，4℃下12000×g离心10min；此时沉淀为蛋白。

6.弃上清液，加2ml 溶液II(洗涤液)清洗沉淀3次，每次清洗过程中，先将沉淀保存于清洗液中20min，然后在4℃下7500×g离心5min。最后一次清洗后，丢弃上层液相，将沉淀悬浮于2ml无水乙醇中，涡旋震荡15s后在室温下放置20min，然后在4℃下7500×g离心5min。

7.丢弃上层液相，将沉淀真空干燥5-10min。然后将沉淀溶解于1% SDS（十二烷基硫酸钠）中。在50℃水浴中反复吹打以助溶。不溶物在4℃下10000×g离心10 min去除。收集上清，转移到新的收集管中。该上清中的蛋白样品可直接用于Western Blotting实验等或保存于-20℃。

常见问题：

1. 得率低：样品裂解或匀浆处理不彻底；最后得到的蛋白质沉淀未完全溶解 

2. 蛋白质降解：组织取出后未马上冷冻 

3. 电泳时条带变形：蛋白质沉淀洗涤不充分

   说明书：植物蛋白提取试剂盒