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产品信息 >> 蛋白相关 >> 蛋白定量试剂盒;
Bradford蛋白定量试剂盒

保存条件:室温,BSA稀释后2-8℃保存。支持常温运输。整体长期保存推荐2-8℃。

规格:800 microplate assays or 100 tube assays

主要组成成分

产品编号

组分

体积

1

Bradford 蛋白检测试剂

2*100ml

2

BSA

4mg(用时加2ml 1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释,2-8℃保存)

产品简介

Bradford法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。其原理是考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后,产生蓝色化合物,化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因此可通过检测595 nm的最大光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本产品将传统的Bradford方法进行了改良,最大限度的加大蛋白定量的线性范围,灵敏度范围为100-1,500 μg/ml。使用本产品反应迅速,颜色产物1小时内保持稳定。适用于多种缓冲液系统。

注意事项

1BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS0.9%生理盐水进行稀释)。

2.本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量,具体干扰物质(具体见附表1),可采用BCA蛋白定量试剂盒(CW0014)或其他蛋白定量产品。

3.所测蛋白分子量必须大于3 kD

4.操作中请佩戴手套。

5.本产品仅限科研使用。

操作步骤

1.稀释BSA标准品:用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。

管号

稀释液用量μl

BSA标准品用量(μl

BSA标准品最终浓度(μg/ml

A

0

100

2000

B

50

150

1500

C

200

200

1000

D

200

200(从C管中取)

500

E

200

200(从D管中取)

250

F

200

200(从E管中取)

125

G

200

0

0(空白)

2.试管检测(检测范围:100-1500 μg/ml

1)按上表稀释标准品,将30 μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。

2)取干净的试管,分别加入30 μl待测蛋白样品(原液或稀释液),并作好标记,推荐每个测定做2-3个平行反应。

3)向步骤1)和步骤2)的试管中各加入1.5 ml Bradford蛋白检测试剂,充分混匀,室温放置10分钟。

4)用分光光度计测定595 nm处的吸光值。

5)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。

注意:数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。

6)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。

3.微孔检测(检测范围:100-1500 μg/ml

1)将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5 μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。

2)每孔加入250 μl Bradford Protein Assay Reagent,充分混匀,盖上96孔板盖,室温放置10分钟。

3)用酶标仪测定595 nm处的吸光值。

4)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。

注意:数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。

5)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。

附表

附表1. 干扰物质表

化合物

耐受浓度

         化合物

耐受浓度

缓冲液

去垢剂和变性剂

乙酸盐

0.2M

Brij35

1%

甘氨酸

1M

脱氧胆酸纳

0.25%

HEPES

0.1M

CHAPS

1%

MES

0.7M

NP-40

干扰

MOPS

0.2M

辛葡糖

2%

Na+-柠檬酸

50mM

SDS

0.1%

PIPES

500mM

Tween-20

干扰

磷酸钠/磷酸钠

1M

Triton X-100

0.1%

乙酸钠

0.6M

糖类

Tris

2M

蔗糖

1mM

盐类

螯合剂

硫酸铵

1M

EDTA

100mM

NaCl

1M

EGTA

50mM

尿素

6M



极性化合物

其他

甘油

99%

HCl

0.1M

还原剂

NaOH

0.1M

β-巯基乙醇

1M

NAD

1mM

DTT

1M

5%

本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途

说明书:Bradford蛋白定量试剂盒

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