保存条件:室温,BSA稀释后2-8℃保存。支持常温运输。整体长期保存推荐2-8℃。 规格:800 microplate assays or 100 tube assays 主要组成成分 产品编号 | 组分 | 体积 | 1 | Bradford 蛋白检测试剂 | 2*100ml | 2 | BSA | 4mg(用时加2ml 1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释,2-8℃保存) |
产品简介 Bradford法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。其原理是考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后,产生蓝色化合物,化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因此可通过检测595 nm的最大光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本产品将传统的Bradford方法进行了改良,最大限度的加大蛋白定量的线性范围,灵敏度范围为100-1,500 μg/ml。使用本产品反应迅速,颜色产物1小时内保持稳定。适用于多种缓冲液系统。 注意事项 1.BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。 2.本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量,具体干扰物质(具体见附表1),可采用BCA蛋白定量试剂盒(CW0014)或其他蛋白定量产品。 3.所测蛋白分子量必须大于3 kD。 4.操作中请佩戴手套。 5.本产品仅限科研使用。 操作步骤 1.稀释BSA标准品:用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。 管号 | 稀释液用量(μl) | BSA标准品用量(μl) | BSA标准品最终浓度(μg/ml) | A | 0 | 100 | 2000 | B | 50 | 150 | 1500 | C | 200 | 200 | 1000 | D | 200 | 200(从C管中取) | 500 | E | 200 | 200(从D管中取) | 250 | F | 200 | 200(从E管中取) | 125 | G | 200 | 0 | 0(空白) |
2.试管检测(检测范围:100-1500 μg/ml) 1)按上表稀释标准品,将30 μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。 2)取干净的试管,分别加入30 μl待测蛋白样品(原液或稀释液),并作好标记,推荐每个测定做2-3个平行反应。 3)向步骤1)和步骤2)的试管中各加入1.5 ml Bradford蛋白检测试剂,充分混匀,室温放置10分钟。 4)用分光光度计测定595 nm处的吸光值。 5)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。 注意:数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。 6)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。 3.微孔检测(检测范围:100-1500 μg/ml) 1)将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5 μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。 2)每孔加入250 μl Bradford Protein Assay Reagent,充分混匀,盖上96孔板盖,室温放置10分钟。 3)用酶标仪测定595 nm处的吸光值。 4)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。 注意:数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。 5)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。 附表 附表1. 干扰物质表 化合物 | 耐受浓度 | 化合物 | 耐受浓度 | 缓冲液 | 去垢剂和变性剂 | 乙酸盐 | 0.2M | Brij35 | 1% | 甘氨酸 | 1M | 脱氧胆酸纳 | 0.25% | HEPES | 0.1M | CHAPS | 1% | MES | 0.7M | NP-40 | 干扰 | MOPS | 0.2M | 辛葡糖 | 2% | Na+-柠檬酸 | 50mM | SDS | 0.1% | PIPES | 500mM | Tween-20 | 干扰 | 磷酸钠/磷酸钠 | 1M | Triton X-100 | 0.1% | 乙酸钠 | 0.6M | 糖类 | Tris | 2M | 蔗糖 | 1mM | 盐类 | 螯合剂 | 硫酸铵 | 1M | EDTA | 100mM | NaCl | 1M | EGTA | 50mM | 尿素 | 6M |
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| 极性化合物 | 其他 | 甘油 | 99% | HCl | 0.1M | 还原剂 | NaOH | 0.1M | β-巯基乙醇 | 1M | NAD | 1mM | DTT | 1M | 苯 | 5% |
本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途 说明书:Bradford蛋白定量试剂盒 |