规格：50 Tests 包装清单 序号 | 产品名称 | 包装 | 1 | Annexin V-FITC 染色液 | 250 μL | 2 | Annexin V Binding Buffer (10 ×) | 5.5 mL | 3 | 碘化丙啶（PI）染色液 | 250 μL | 4 | 说明书 | 1份 |
产品简介 诺梵生物自主研发的 Annexin V-FITC / PI 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒用于鉴定凋亡和坏死细胞。 Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，PI 可进入细胞内对 DNA 进行染色，与 Annexin V 搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。 产品使用说明 本试剂盒中 Annexin V Binding Buffer(10 ×)为 10 ×浓缩液，实验前用去离子水稀释成 1 ×工作液。 例如：取 1 mL Annexin V Binding Buffer (10 ×)，加入去离子水定容至 10 mL 即可。 实验操作指南步骤 一步法 1．细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 g 离心 5 min，弃上清，收集细胞，PBS 洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。 注：本品仅在悬浮培养的细胞中验证，良好的细胞状态是实验的关键。贴壁生长的细胞用于凋亡检测时，可能会因为胰酶消化、吹打等处理导致细胞的坏死或凋亡，对实验结果可能存在不可控的影响，请谨慎处理。 2．取 1~5 × 105 重悬的细胞，300 g 离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加 入 500 μL 稀释的 1 ×Annexin V Binding Buffer 工作液重悬细胞。 3．细胞悬液中加入 5 μL 的 Annexin V-FITC 和 5 μL 的碘化丙啶(PI)染色液。 4．轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。 5．反应完成后立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于 1 小时内完成检测。 注：a)流式细胞仪检测请取阴性样本（如未经药物处理的活细胞）进行 Annexin V-FITC 和 PI 双染，作为阴性对照；另取阳性样本（如毒性药物处理的细胞）分别进行 Annexin V-FITC 和 PI 单染，作为调节荧光补偿的单阳对照。 b)流式细胞仪检测时 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 优先选 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 PE 通道。 两步法 1．细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 g 离心 5 min，弃上清，收集细胞，PBS 洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。 注：本品仅在悬浮培养的细胞中验证，良好的细胞状态是实验的关键。贴壁生长的细胞用于凋亡检测时，可能会因为胰酶消化、吹打等处理导致细胞的坏死或凋亡，对实验结果可能存在不可控的影响，请谨慎处理。 2．取 1~5 × 105 重悬的细胞，300 g 离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加 入 100 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer 工作液重悬细胞。 3．细胞悬液中加入 2.5 μL 的 Annexin V-FITC 和 2.5 μL 的碘化丙啶(PI)染色液。（由于两步法分辨率更高，染色液用量减半依然可得到媲美一步法的效果；用户亦可根据自己的模型进行滴定后加入适量的染色液，用更少的量获得高质量的结果。） 4．轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。 5．加入 400 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer，混匀样本。 6．立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于 1 小时内完成检测。 注：a)流式细胞仪检测请取阴性样本（如未经药物处理的活细胞）进行 Annexin V-FITC 和 PI 双染，作为阴性对照；另取阳性样本（如毒性药物处理的细胞）分别进行 Annexin V-FITC 和 PI 单染，作为调节荧光补偿的单阳对照。 b)流式细胞仪检测时 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 优先选 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 PE 通道。 保存条件 2~8°C 可保存 1 年。Annexin V-FITC 和碘化丙啶（PI）染色液需要避光保存。 注意事项 1. 保质期 1 年，为获得最佳的使用效果，请在 3~6 个月内使用，Annexin V-FITC 禁止冷冻保存。 2. 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。 3. 荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 说明书：Annexin V-FITC PI 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒 |
