Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000（rapid lysis）

线性 PEI 转染试剂（速溶型）MW40000

产品信息

 产品描述

PEI 40000 是一种分子量为 40000 的高电荷阳离子聚合物，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成复合物，并使该复 合物进入细胞中。PEI 40000 是一种瞬时转染试剂，细胞毒性低，转染效率高，在 HEK293 和 CHO 等细胞中基因表达效率 较高。目前已经验证线性 PEI 转染试剂广泛适用于多种细胞系包括 HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3 、 Sf9、HepG2 和 Hela 细胞等。转染效率高达 80%~90%。

PEI 40000 与 PEI 25000 转染试剂相比，具有很多优点。包括：1.PEI 40000 较易溶解，可直接在水中溶解，PEI 25000 需要先把水调成弱酸性助其溶解，溶解后再用 NaOH 把 pH调至中性；2.PEI 40000 操作简便，更易于使用，且比 PEI 25000 的转染效果好；3.PEI 25000含有 4-11％的丙酰基残留，其能阻止聚合物主链与 DNA 结合。相较于 PEI 25000，PEI40000 是完全脱落的结构，因此其性能始终高效如一。

本产品为速溶型，溶解迅速，配制方便。

 产品性质

 运输与保存方法

运输方式：室温运输。

保存方式：粉末在室温或 4 oC 保存，有效期 2 年。储存液在 4 oC 保存，有效期至少 3个月。

 注意事项

1）对大多数细胞来而言，每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI MAX 转染试剂都能获得较高转染效率。也可尝试每 1 μg DNA 使用 1.5~4 μL 体积线性 PEI 40000 转染试剂进行优化。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。

3）本产品仅用于科研用途，不可用于人体。

 储存液配置（1 mg/mL）

1.材料

PEI 40000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或类似的生物级水、1 mol/L 氢氧化钠（NaOH）、一次性 0.1~0.2 μm PES 真空无 菌过滤器、无菌 HDPE 或聚丙烯储存瓶。

2. 配置储存液（1 mg/mL）

1）于 1 L 玻璃烧杯，将 1 g PEI 40000 粉末加入 900 mL Milli-Q®超纯水或其他相当级别的生物用水中，在磁子搅拌器上搅拌 均匀，产生小涡。

2）待 PEI 40000 完全溶解（通常不到 5min）；

3）边搅拌边滴加 1 mol/L 氢氧化钠溶液，调节 pH 为 6.90~7.10；

注：如果 pH 值>7.10，请使用盐酸将 pH 值调至 6.90~7.10；

4）将溶液转入量筒内，并加水定容到 1 L。

5）用一次性 0.1~0.2 μm PES 真空过滤器过滤除菌，即得到 1 mg/mL 的储存液。

6）根据需要分装并储存在 4 °C，至少 3 个月稳定。

 转染操作流程（以 6 孔板为例）

1.接种细胞：为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，以转染时细胞密度在 70%~80%为宜。

2.准备 DNA-PEI 复合物：按照以下体系配制 DNA-PEI 核酸-转染试剂复合物：

1）对于每孔细胞，使用 100 μL 无血清培养基稀释 2 μg 目的 DNA，充分混匀成 DNA 稀释液。

注：无血清稀释液建议采用 Opti-MEM 或 ddH2O

2）立刻向 100 μL 的 DNA 稀释液中加入 4 μL 的 PEI 40000 转染试剂，旋涡 10 秒，充分混匀。

3）在室温下孵育 10~15 min，使得形成 DNA-PEI 阳离子核酸转染试剂复合物。

3.转染细胞：

1）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入 2 mL 新鲜预热的完全培养基。

2）直接将 100 μL DNA-PEI 核酸-PEI 复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。

3）37 ℃，5% CO2 培养箱培养，转染后最快 5 h 即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。

4.稳转筛选（可选）

转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍以上），37 ℃，5% CO2培养箱孵育过夜。第二天加入 与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

 不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：