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产品信息 >> 核酸相关 >> 磁珠法核酸提取试剂盒
磁珠法核酸提取试剂盒

产品名称: 核酸提取或纯化试剂试剂盒(磁珠法)

包装规格:96次/盒,800次/盒

预期用途:用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。其处理后的产物用于临床体外检测使用。

检验原理:本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的从全血、组织匀浆液、拭子,以及血清、血浆、肺泡灌洗液等无细胞体液中提取DNA/RNA的方法。独特的缓冲体系使裂解液中的核酸高效特异地结合在磁珠上,获得的核酸纯度高,质量稳定,不含蛋白、核酸酶和其他杂质,可适用于各种常规操作,包括PCR、荧光定量PCR等实验。

 主要组成成分:

试剂名称

96次 /盒

800次 /盒

规格

数量

规格

数量

裂解缓冲液

25 mL/瓶

1 瓶

200 mL/瓶

1 瓶

漂洗缓冲液 1

50 mL/瓶

1 瓶

480 mL/瓶

1 瓶

漂洗缓冲液 2

50 mL/瓶

1 瓶

480 mL/瓶

1 瓶

无RNA酶的水

10 mL/瓶

1 瓶

100 mL/瓶

1 瓶

蛋白酶 K(可选)

1.25 mL/支

2 支

20 mL/支

1 瓶

磁珠悬浮液

1.5 mL/支

1 支

10 mL/支

1 瓶

 储存条件及有效期:

蛋白酶K于 -20℃±5℃保存,其余组分于4-30℃保存,有效期12个月。 可在4-37℃运输,运输时间建议不超过7天。

 样本要求:

全血、组织匀浆液(需蛋白酶K);拭子,以及血清、血浆、肺泡灌洗液等无细胞体液。

 自备仪器、试剂:

1.手动单管提取:

  1)恒温混匀仪

2)2/15 ml磁力架

3)异丙醇

2.32孔核酸提取:

1)32孔全自动核酸提取仪

2)异丙醇

3)96孔深孔板、 8联深孔磁套

3.96孔核酸提取:

1)96孔全自动核酸提取仪

2)异丙醇

3)96孔深孔板、 96深孔板磁套

 检验方法:

实验前准备:使用前请将所有试剂颠倒混匀3-5次。磁珠悬浮液使用前需在涡旋混匀仪上充分重悬,或充分颠倒混匀,在一次性加样32-48次后,建议再次混匀后再继续加样。

 1.手动单管操作

1.1 取1.5 mL离心管(自备),加入20 μL蛋白酶K(可选),200 μL样本(样本需平衡至室温),200 μL裂解缓冲液,300 μL异丙醇,涡旋震荡5秒后,置于室温,1200 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀10 分钟。

注:1.若样本为全血或组织匀浆液,则需加入蛋白酶K;若为拭子或血清、血浆、肺泡灌洗液等无细胞体液,无需加入蛋白酶K。

2.湿拭子样本,充分震荡混匀后取200 μL进行提取。干拭子样本浸泡于400 μL生理盐水中,充分震荡混匀后静置5分钟,12,000 rpm离心1分钟后,取200 μL进行提取。

1.2 向离心管中加入10 μL磁珠悬浮液,涡旋震荡10秒,置于室温,1200 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。

1.3 将离心管置于磁力架,磁珠完全吸附后,小心吸弃所有液体。

1.4 向离心管中加入500 μL 漂洗缓冲液1,涡旋震荡,置于室温,1200 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟。

1.5 将离心管置于磁力架,磁珠完全吸附后,小心吸弃所有液体。

1.6 向离心管中加入500 μL 漂洗缓冲液2,涡旋震荡,置于室温,1200 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟。

1.7 将离心管置于磁力架,磁珠完全吸附后,小心吸弃所有液体。

1.8 晾干离心管2-5分钟,确保无乙醇残留。

1.9 向离心管中加入100 μL无RNA酶的水,涡旋震荡,56℃,1200 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。。

1.10 离心管置于磁力架上,磁珠吸附后,收集核酸溶液于新的离心管中,置于-80℃长期保存。

 2. 32孔自动核酸提取

可一次性从1-32份样本中提取DNA/RNA。

2.1 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂(样本需平衡至室温):

位置

试剂及用量

1&7 列

蛋白酶K: 20 μL(可选)

样本: 200 μL

裂解缓冲液: 200 μL

异丙醇: 300 μL

2&8 列

漂洗缓冲液1: 500 μL

3&9 列

漂洗缓冲液2: 500 Μl

磁珠悬浮液: 10 μL

6&12 列

无RNA酶的水: 100 μL

2.2 将加样板放入多型号自动核酸提取器,放入磁棒套,运行设定程序。约25分钟后取出96孔深孔板,将第6、12列的样本转移至离心管中,-80℃长期保存。其中核酸提取程序也可自行编订,典型如下:

步骤编号

孔位

运行类型

震荡时间(秒)

分离时间(秒)

挥发时间(秒)

温度

1

1&7

震荡裂解

600

0

0

0

2

3&9

磁珠转移

10

5

0

0

3

1&7

核酸结合

300

15

0

0

4

2&8

洗涤1

120

5

0

0

5

3&9

洗涤2

120

0

0

0

6

3&9

洗涤2

0

5

300

0

7

6&12

洗脱

300

20

0

56℃

8

2&8

弃磁珠

5

0

0

0

 3. 96孔自动核酸提取

可一次性从1-96份样本中提取DNA/RNA。

3.1 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂(样本需平衡至室温):

位置

试剂及用量

磁套板

96孔磁力搅拌套

 

 

样本板

蛋白酶K: 20 μL(可选)

样本: 200 μL

裂解缓冲液: 200 μL

异丙醇: 300 μL

漂洗板1

漂洗缓冲液1: 500 μL

漂洗板2

漂洗缓冲液2: 500 Μl

磁珠悬浮液: 10 μL

洗脱板

无RNA酶的水: 100 μL

3.2 运行相应程序,按照仪器提示放入以上96孔深孔板。约30分钟后,程序运行结束,将洗脱板中样本转移至离心管中,-80℃长期保存。其中核酸提取程序也可自行编订,典型如下:

步骤编号

孔位

运行类型

震荡时间(秒)

分离时间(秒)

挥发时间(秒)

温度

1

1&7

震荡裂解

600

0

0

0

2

3&9

磁珠转移

10

5

0

0

3

1&7

核酸结合

300

15

0

0

4

2&8

洗涤1

120

5

0

0

5

3&9

洗涤2

120

0

0

0

6

3&9

洗涤2

0

5

300

0

7

6&12

洗脱

300

20

0

56℃

8

2&8

弃磁珠

5

0

0

0


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