产品名称: 核酸提取或纯化试剂试剂盒(磁珠法) 包装规格:96次/盒,800次/盒 预期用途:用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。其处理后的产物用于临床体外检测使用。 检验原理:本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的从全血、组织匀浆液、拭子,以及血清、血浆、肺泡灌洗液等无细胞体液中提取DNA/RNA的方法。独特的缓冲体系使裂解液中的核酸高效特异地结合在磁珠上,获得的核酸纯度高,质量稳定,不含蛋白、核酸酶和其他杂质,可适用于各种常规操作,包括PCR、荧光定量PCR等实验。 主要组成成分: 试剂名称 | 96次 /盒 | 800次 /盒 | 规格 | 数量 | 规格 | 数量 | 裂解缓冲液 | 25 mL/瓶 | 1 瓶 | 200 mL/瓶 | 1 瓶 | 漂洗缓冲液 1 | 50 mL/瓶 | 1 瓶 | 480 mL/瓶 | 1 瓶 | 漂洗缓冲液 2 | 50 mL/瓶 | 1 瓶 | 480 mL/瓶 | 1 瓶 | 无RNA酶的水 | 10 mL/瓶 | 1 瓶 | 100 mL/瓶 | 1 瓶 | 蛋白酶 K(可选) | 1.25 mL/支 | 2 支 | 20 mL/支 | 1 瓶 | 磁珠悬浮液 | 1.5 mL/支 | 1 支 | 10 mL/支 | 1 瓶 |
储存条件及有效期: 蛋白酶K于 -20℃±5℃保存,其余组分于4-30℃保存,有效期12个月。 可在4-37℃运输,运输时间建议不超过7天。 样本要求: 全血、组织匀浆液(需蛋白酶K);拭子,以及血清、血浆、肺泡灌洗液等无细胞体液。 自备仪器、试剂: 1.手动单管提取: 1)恒温混匀仪 2)2/15 ml磁力架 3)异丙醇 2.32孔核酸提取: 1)32孔全自动核酸提取仪 2)异丙醇 3)96孔深孔板、 8联深孔磁套 3.96孔核酸提取: 1)96孔全自动核酸提取仪 2)异丙醇 3)96孔深孔板、 96深孔板磁套 检验方法: 实验前准备:使用前请将所有试剂颠倒混匀3-5次。磁珠悬浮液使用前需在涡旋混匀仪上充分重悬,或充分颠倒混匀,在一次性加样32-48次后,建议再次混匀后再继续加样。 1.手动单管操作 1.1 取1.5 mL离心管(自备),加入20 μL蛋白酶K(可选),200 μL样本(样本需平衡至室温),200 μL裂解缓冲液,300 μL异丙醇,涡旋震荡5秒后,置于室温,1200 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀10 分钟。 注:1.若样本为全血或组织匀浆液,则需加入蛋白酶K;若为拭子或血清、血浆、肺泡灌洗液等无细胞体液,无需加入蛋白酶K。 2.湿拭子样本,充分震荡混匀后取200 μL进行提取。干拭子样本浸泡于400 μL生理盐水中,充分震荡混匀后静置5分钟,12,000 rpm离心1分钟后,取200 μL进行提取。 1.2 向离心管中加入10 μL磁珠悬浮液,涡旋震荡10秒,置于室温,1200 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。 1.3 将离心管置于磁力架,磁珠完全吸附后,小心吸弃所有液体。 1.4 向离心管中加入500 μL 漂洗缓冲液1,涡旋震荡,置于室温,1200 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟。 1.5 将离心管置于磁力架,磁珠完全吸附后,小心吸弃所有液体。 1.6 向离心管中加入500 μL 漂洗缓冲液2,涡旋震荡,置于室温,1200 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟。 1.7 将离心管置于磁力架,磁珠完全吸附后,小心吸弃所有液体。 1.8 晾干离心管2-5分钟,确保无乙醇残留。 1.9 向离心管中加入100 μL无RNA酶的水,涡旋震荡,56℃,1200 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。。 1.10 离心管置于磁力架上,磁珠吸附后,收集核酸溶液于新的离心管中,置于-80℃长期保存。 2. 32孔自动核酸提取 可一次性从1-32份样本中提取DNA/RNA。 2.1 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂(样本需平衡至室温): 位置 | 试剂及用量 | 1&7 列 | 蛋白酶K: 20 μL(可选) 样本: 200 μL 裂解缓冲液: 200 μL 异丙醇: 300 μL | 2&8 列 | 漂洗缓冲液1: 500 μL | 3&9 列 | 漂洗缓冲液2: 500 Μl 磁珠悬浮液: 10 μL | 6&12 列 | 无RNA酶的水: 100 μL |
2.2 将加样板放入多型号自动核酸提取器,放入磁棒套,运行设定程序。约25分钟后取出96孔深孔板,将第6、12列的样本转移至离心管中,-80℃长期保存。其中核酸提取程序也可自行编订,典型如下: 步骤编号 | 孔位 | 运行类型 | 震荡时间(秒) | 分离时间(秒) | 挥发时间(秒) | 温度 | 1 | 1&7 | 震荡裂解 | 600 | 0 | 0 | 0 | 2 | 3&9 | 磁珠转移 | 10 | 5 | 0 | 0 | 3 | 1&7 | 核酸结合 | 300 | 15 | 0 | 0 | 4 | 2&8 | 洗涤1 | 120 | 5 | 0 | 0 | 5 | 3&9 | 洗涤2 | 120 | 0 | 0 | 0 | 6 | 3&9 | 洗涤2 | 0 | 5 | 300 | 0 | 7 | 6&12 | 洗脱 | 300 | 20 | 0 | 56℃ | 8 | 2&8 | 弃磁珠 | 5 | 0 | 0 | 0 |
3. 96孔自动核酸提取 可一次性从1-96份样本中提取DNA/RNA。 3.1 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂(样本需平衡至室温): 位置 | 试剂及用量 | 磁套板 | 96孔磁力搅拌套 | 样本板 | 蛋白酶K: 20 μL(可选) 样本: 200 μL 裂解缓冲液: 200 μL 异丙醇: 300 μL | 漂洗板1 | 漂洗缓冲液1: 500 μL | 漂洗板2 | 漂洗缓冲液2: 500 Μl 磁珠悬浮液: 10 μL | 洗脱板 | 无RNA酶的水: 100 μL |
3.2 运行相应程序,按照仪器提示放入以上96孔深孔板。约30分钟后,程序运行结束,将洗脱板中样本转移至离心管中,-80℃长期保存。其中核酸提取程序也可自行编订,典型如下: 步骤编号 | 孔位 | 运行类型 | 震荡时间(秒) | 分离时间(秒) | 挥发时间(秒) | 温度 | 1 | 1&7 | 震荡裂解 | 600 | 0 | 0 | 0 | 2 | 3&9 | 磁珠转移 | 10 | 5 | 0 | 0 | 3 | 1&7 | 核酸结合 | 300 | 15 | 0 | 0 | 4 | 2&8 | 洗涤1 | 120 | 5 | 0 | 0 | 5 | 3&9 | 洗涤2 | 120 | 0 | 0 | 0 | 6 | 3&9 | 洗涤2 | 0 | 5 | 300 | 0 | 7 | 6&12 | 洗脱 | 300 | 20 | 0 | 56℃ | 8 | 2&8 | 弃磁珠 | 5 | 0 | 0 | 0 |
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