RT-RAP-CRISPR/Cas12a核酸试纸条

检测原理

按照RAA‑CRISPR/Cas12a检测组合物设计，包括用于检测基因的上游引物‑F和下游引物R引物对、向导gRNA和5’端起第1位碱基T标记FAM发光基团，第8位碱基T进行生物素(Biotin)修饰的探针。提供的试纸条包括样品结合垫、检测线和质控线，样品结合垫含有胶体金标记的鼠抗FAM的单克隆抗体，检测线含有山羊抗鼠IgG抗体，质控线含有链霉亲和素。

主要组成部分

PVC底板，硝酸纤维膜、玻纤及滤纸块组成

有效期

有效期为6个月

储存条件

将试纸条存放在密封的容器中，在干燥、避光以及阴凉的环境（2~8℃）中保存。不要扔掉干燥剂。避免将试纸条暴露于日光下或潮湿、温度升高、具有化学气体的环境中。在适当条件下存放时，试纸条在指定有效期内的性能是稳定的，即使开启后亦如此。请不要触摸测试块。

使用须知

1、试纸为一次性用品，不可重复使用；

2、铝箔复合包装内有干燥剂，不得服用；

3、拆开试纸后请尽快使用；

4、如试纸条变色，请勿使用；

5、应在项目规定时间内判断结果；

6、请勿用手直接触摸试纸部分，以免污染；

7、本产品仅供科研用。

检测方法

(1)提取待测样品的RNA；

(2)RT‑RAA反应体系扩增：以提取的待测样品RNA为模板，向反应装置的外套管中加入检测试剂的所述RT‑RAA扩增体系的试剂，同时向内套管中加入所述CRISPR/Cas12a酶切体系的试剂，然后进行核酸扩增，37℃恒温扩增10min；

(3)扩增反应结束后，通过涡旋将内套管中的CRISPR/Cas12a酶切体系释放至外套管中，利用Cas12a酶的附属切割活性切割荧光生物素探针，37℃恒温反应10min，将胶体金试纸条加样端直接插入反应液中，室温反应1min，观察条带。

结果判定

阳性结果在试纸条上呈现为两条红色条带，分别在检测区（T）和质控区（C）或者有一条检测线；阴性结果仅在试纸条质控区（C）有一条红色条带，检测区（T 线）没有条带；当试纸条未使用和检测结果无效时，试纸条质控区（C 线）和检测区（T 线）均未出现条带，提示该试纸条还没使用或已损坏、扩增试剂失效等。