说明书下载：GST 琼脂糖凝说明书

产品规格：10ml

产品价格：980元

保存条件：20%乙醇中2-8℃保存。

产品简介：

Glutathione Beads是以4%琼脂糖凝胶为基质，用化学方法共价结合了还原型谷胱甘肽制作而成。这种特别设计使树脂的纯化效率得到了提高,具有载量高、特异性好,尤其适用于在大肠杆菌、昆虫细胞和哺育动物细胞中表达的GST 融合表达蛋白。该填料具有很好的物理和化学稳定性，使用寿命长，使用方便，批次重复性好，可一步分离得到纯度较高的目标蛋白，纯化条件温和，可以保证蛋白的活性。

支  持  物： 4%琼脂糖微球

载    量：  15-25mgHis 标签蛋白/ml 填料

粒    径： 45-165 μm

注意事项

1. 蛋白层析应使用高纯度的试剂和水，层析前缓冲液应用0.45μm 滤膜过滤后使用。另外为防止柱子阻塞，上柱前建议将裂解液进行离心，或者使用0.45μm 滤膜过滤。

2. GST 融合蛋白与还原型谷胱甘肽的结合比较缓慢，为获得最大结合量，上样流速建议为：0.2-1ml/分钟 (6ml 层析柱），0.5-2ml/分钟（12ml 层析柱）。对于吸附效果不好的样品，可以先把介质和样品混合，轻轻振摇 2-4 小时，再装柱，用平衡缓冲液进行重新平衡、洗脱等操作，另外在细菌抽提试剂中添加5mMDTT，可以显著提高GST 标签结合能力

3. 不同的 GST 融合蛋白取得最佳纯化效果所需还原型谷胱甘肽浓度、洗脱体积和洗脱时间可能有所不同。必要时需对流穿液、洗脱液进行 SDS-PAGE 以及 Western 杂交分析，以确定最佳纯化条件。

4. GST 融合蛋白以包涵体形式存在时不能与介质结合，必须先进行变性、复性、透析处理后才能用介质进行纯化。建议优化蛋白表达条件尽量使蛋白可溶性表达。

5. 如后续实验需要除去洗脱液中还原型谷胱甘肽，可采用超滤或透析的方法。

溶液配制

结合缓冲液（PBS）：10mMNa2HPO4，1.8mMKH2PO4，140mMNaCl，2.7mMKCl，pH7.4

洗脱缓冲液：10mMNa2HPO4，1.8mMKH2PO4，140mMNaCl，2.7mMKCl，10mM还原型谷胱甘肽（GSH），pH7.4。将0.1g还原型谷胱甘肽（GSH）溶于30ml 结合缓冲液，或将0.25g 溶于75ml 结合缓冲液中。

再生缓冲液1：0.1MTris-HCl，0.5MNaCl，0.1%SDS，pH8.5

再生缓冲液2：0.1MSodiumacetate，0.5MNaCl，0.1%SDS，pH4.5

操作步骤

组装层析柱

1. 将 GST-Agarose 填料混合均匀直至重悬，用吸管移取适量的填料至层析柱中。室温静置10 分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。

注意：填料的上层是乙醇保护液，将填料与乙醇一起混匀，以每ml 填料纯化15-25mgGST 标签蛋白计算，取需要的填料与乙醇混合液加入层析柱中。

2.加入5 倍柱体积的去离子水洗涤，再用10 倍柱体积的结合缓冲液平衡，平衡结束后即可上样。注意：柱体积指的是填料的体积。

GST 融合蛋白的纯化

1. 将层析柱的出口连接上紫外蛋白监测仪，根据紫外蛋白监测仪观察 280nm 处的吸收值来监控层析柱流出蛋白情况。

2. 上样：将制备的蛋白样品用结合缓冲液等体积稀释后，加入到已平衡好的层析柱中，建议上样流速为：0.5-1ml/min(6ml 层析柱），1-2ml/min（12ml 层析柱）。观察280nm 吸收情况并收集流穿蛋白。

注意：1）样品在上柱前可以离心或0.45 μm 微孔滤膜过滤。

2）通过控制加入的菌体裂解液的速度或流出速度来控制柱流速，流速过快会影响柱效。 

3. 洗涤：使用10 倍柱体积的结合缓冲液过柱，洗涤杂蛋白，观察280nm 吸收情况并收集杂蛋白。建议洗涤流速为：0.5-1ml/min(6ml 层析柱），1-2ml/min（12ml 层析柱）。

4. 洗脱：使用 10-15 倍柱体积的新鲜配制的洗脱缓冲液过柱，洗脱目的蛋白，观察280 nm 吸收情况并收集目的蛋白。建议洗涤流速为0.5-1ml/min(6ml 层析柱），1-2ml/min（12ml 层析柱）。

5. 蛋白检测：分别取等量的流穿液，洗涤液和目的蛋白洗脱液进行 SDS-PAGE 以分析蛋白的层析情况。

6. 洗脱后，依次用 3-5 倍柱体积的结合缓冲液和3-5 倍柱体积的去离子水洗涤填料，再用2-3 倍柱体积的20%乙醇洗涤乙醇要将填料浸没），4℃保存。

柱再生

当填料使用多次后，结合效率会有下降，可用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。

1. 使用5 倍柱体积的再生缓冲液1 洗涤填料，而后用5-10 倍柱体积超纯水洗涤。

2. 使用5 倍柱体积的再生缓冲液2 洗涤填料，而后用5-10 倍柱体积超纯水洗涤。

3. 保存：使用2-3 倍柱体积的20%乙醇洗涤，将层析柱的头尾密封后（乙醇要将填料浸没）4℃保存。

4. 再次使用时加入5 倍柱体积的去离子水将乙醇洗涤后，使用10 倍柱体积的结合缓冲液平衡填料，平衡结束后即可上样。