保存条件：室温，BSA稀释后2-8℃保存。支持常温运输。整体长期保存推荐2-8℃。

规格：500 microplate assays

主要组成成分

产品简介

BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA（Bicin-choninic Acid）法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物，同时将Cu2+还原成Cu+。BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物。在562 nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白（BSA）溶液作为蛋白质标准品溶液，测定范围为20～2000 μg/ml。

注意事项

1．本产品可以采用分光光度计（试管检测法）或者酶标仪（微孔检测法）测定蛋白浓度。

2．建议每次测定蛋白样品时，绘制标准曲线，以获得准确数据。

3．BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致（可用1×PBS或0.9%生理盐水稀释）。

4．如待测样品中含较多的干扰物质（具体见附表1），可采用Bradford法蛋白定量试剂

盒（本公司生产）或其他蛋白定量产品。

操作步骤

1．稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。

2．配置BCA工作液：

1）计算BCA工作液总量：

BCA工作液总量=（BSA标准品样本个数+未知样本个数）×复孔数×每个样本BCA工作液体积

举例：BSA标准品样本个数为7个，未知样本个数2个，复孔数3个。

试管检测法：

BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×2 ml/每个样本工作液体积=54 ml

微孔检测法：

BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×200 μl/每个样本工作液体积=5.4ml

2）根据计算出的BCA工作液需要总量，将BCA-A和BCA-B按照50:1的体积比，配制BCA工作液，充分混匀。

注意：1）由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1-2个孔。

2）新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24小时。

3．定量检测

3a. 试管检测法（蛋白浓度检测范围：20-2000 μg/ml）

1）按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各100 μl分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。

2）向每个试管中各加入2 ml BCA工作液，充分混匀，37℃水浴中孵育30分钟，将各管冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。

3）用分光光度计在562 nm处，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。

4）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。

3b. 微孔检测法（蛋白浓度检测范围：20-2000 μg/ml）

1）按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各25 μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。

2）每孔加入200 μl BCA工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30分钟，冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。

3）用酶标仪在540-590 nm范围内，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。

4）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。

注意：1）BCA法测定蛋白浓度时，吸光值会随着时间的延长不断加深。因此所有样品测定需在3-5

分钟内完成，否则会影响蛋白定量的准确度。

2）建议以去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。

3）由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。

4）未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。

5）如果得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

附表

附表1. 干扰物质表

本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途

说明书：BCA蛋白定量试剂盒