产品规格：50次 保存条件：试剂盒于常温运输。长期保存溶液I 2-8℃避光保存，其他组分室温（15-25℃）保存。 包装清单： 序号 | 产品名称 | 包装 | 1 | 溶液I(Trizol Reagent) | 60 mL | 2 | 溶液II(洗涤液) | 12 mL（用前加48ml无水乙醇） | 3 | 溶液Ⅲ(RNase-Free Water) | 10 mL | 4 | 纯化柱 | 50个 | 5 | 废液收集管 | 50个 | 6 | 溶液Ⅳ | 120ml | 7 | 说明书 | 1份 |
产品简介： 本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒，裂解液充分裂解并匀质化样本，采用独特的硅基质膜吸附技术，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的RNA，同时最大限度的有效除去蛋白质、无机盐离子及有机杂质等；可从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中快速提取总RNA，每次可处理30-50 mg组织或5×106细胞，可同时处理多个不同样品。本试剂盒提取得到的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。本试剂盒配备了溶液Ⅳ，用于提取外周血白细胞RNA的提取，如不需要可省略此步骤。 实验前准备： 1.自备试剂：氯仿(新开封或提取RNA专用)、无RNase水（可本公司购买）配制的70%乙醇、无水乙醇。 2.预防酶污染：使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染；玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌；配制溶液应使用无RNase的水；操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。 3．使用前若发现溶液I有沉淀，可置于56℃水浴几分钟，即可溶解。 4．第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在溶液II中加入无水乙醇。 5．所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。 使用说明： 1．样品处理 1a.植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在溶液I中迅速研磨，每30-50 mg组织加入1 ml 溶液I，混匀。 1b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎，每30-50 mg组织加入1 ml 溶液I，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入溶液I 1 ml混匀。 1c.单层培养细胞：吸去培养液，可直接在培养板中加入适量溶液I（每10 cm2面积需要 1 ml 溶液I），用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5 min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清，加入溶液I 1 ml混匀。 1d.细胞悬液：离心收集细胞。每5×106-1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1 ml 溶液I。 1e.血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积的溶液I（推荐0.25 ml全血加入0.75 ml 溶液I），充分振荡混匀。 1f.血液白细胞RNA提取处理： 1f-1.取2ml收集在肝素或EDTA处理过的试管中的全血，放进离心管中。 1f-2.收集血细胞：3000rpm（400xg）离心5分钟，得到相对清凉的上清液（大约占30%的体积）和一大块细胞沉淀物（大约占60-70%总体积）。小心从样品顶部吸走上清。要格外小心不要搅动细胞沉淀。注意由于红细胞裂解。血浆可能是红色。 1f-3.加2ml溶液Ⅳ，小心吸放4-5次，重悬沉淀物。 1f-4.收集血细胞：3000rpm（400xg）离心5分钟.3000rpm（400xg）离心5分钟。 注意：在这一步，清晰的沉淀物可能是看不见的。用移液管从顶部移走2毫升上清。保留管中剩余的上清液和细胞沉淀。 1f-5.重复步骤1f-3，1f-4两次（共三次）。 注意：因为白细胞占血液体积的大约1%，细胞沉淀物的大小在红细胞裂解的过程中应该显著减少。在1f-3到1f-5步的操作中小心防止白细胞丢失。 1f-6.避开细胞沉淀物，小心吸走几乎所有上清，只保留100ul上清液。然后加入溶液I 1 ml到细胞中混匀。 1g.可选步骤：对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎，可以在匀浆处理后4℃，12,000 rpm（~13,400×g）离心10分钟以除去不溶物质，此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在于上清中。 2．样品中加入溶液I后反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。 3．以每1 ml 溶液I加入200 μl氯仿的比例加入氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2分钟。 4．4℃ 12,000 rpm（~13,400×g）离心10分钟，此时样品分为三层：下层有机相，中间层和上层无色水相，RNA主要在上层水相中，将上层水相移到一个新的RNase-Free离心管（自备）中。 5．在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇（无RNase水配制，可联系本公司购买），颠倒混匀。 6．将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中。若一次不能加完溶液，可分多次转入。室温2min，12,000 rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 7．向吸附柱中加入500 μl 溶液II（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 8．重复步骤7。 9．12,000 rpm离心2 分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干。 特别注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应（酶切、PCR等）。 10．将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位加入30-50 μl 溶液Ⅲ，室温放置1分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。 注意： 1）溶液Ⅲ体积不应小于30 μl，体积过小影响回收率。 2）如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤10。 说明书：超纯外周血白细胞RNA提取试剂盒 |
