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产品信息 >> 核酸相关 >> 吸附柱法核酸提取试剂盒;
超纯RNA提取试剂盒

产品规格:50次

保存条件:试剂盒于常温运输。长期保存溶液I 2-8℃避光保存,其他组分室温(15-25℃)保存。

包装清单:

序号

产品名称

包装

1

溶液I(Trizol   Reagent)

60 mL

2

溶液II(用前加48ml无水乙醇 )

12 mL

3

溶液Ⅲ(RNase-Free Water)

10 mL

4

纯化柱

50个

5

废液收集管

50个

6

说明书

1份

产品简介:

本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒,裂解液充分裂解并匀质化样本,采用独特的硅基质膜吸附技术,通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的RNA,同时最大限度的有效除去蛋白质、无机盐离子及有机杂质等;可从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中快速提取总RNA,每次可处理30-50 mg组织或5×106细胞,可同时处理多个不同样品。本试剂盒提取得到的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。本试剂盒配备了溶液Ⅳ,用于提取外周血白细胞RNA的提取,如不需要可省略此步骤。

实验前准备:

1.自备试剂:氯仿(新开封或提取RNA专用)、无RNase水(可本公司购买)配制的70%乙醇、无水乙醇。

2.预防酶污染:使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染;玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌;配制溶液应使用无RNase的水;操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。

3.使用前若发现溶液I有沉淀,可置于56℃水浴几分钟,即可溶解。

4.第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在溶液II中加入无水乙醇。

5.所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。

使用说明:

1.样品处理

1a.植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在溶液I中迅速研磨,每30-50 mg组织加入1 ml 溶液I,混匀。

1b.动物组织:取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎,每30-50 mg组织加入1 ml 溶液I,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入溶液I 1 ml混匀。

1c.单层培养细胞:吸去培养液,可直接在培养板中加入适量溶液I(每10 cm2面积需要 1 ml 溶液I),用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后,将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中,300×g离心5 min,收集细胞沉淀,仔细吸除所有上清,加入溶液I 1 ml混匀。

1d.细胞悬液:离心收集细胞。每5×106-1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1 ml 溶液I。

1e.血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积的溶液I(推荐0.25 ml全血加入0.75 ml 溶液I),充分振荡混匀。

1f.可选步骤:对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品,如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎,可以在匀浆处理后4℃,12,000 rpm(~13,400×g)离心10分钟以除去不溶物质,此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA,而RNA存在于上清中。

2.样品中加入溶液I后反复吹打几次,使样本充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。

3.以每1 ml 溶液I加入200 μl氯仿的比例加入氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置2分钟。

4.4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心10分钟,此时样品分为三层:下层有机相,中间层和上层无色水相,RNA主要在上层水相中,将上层水相移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。

5.在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制,可联系本公司购买),颠倒混匀。

6.将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中。若一次不能加完溶液,可分多次转入。室温2min,12,000 rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

7.向吸附柱中加入500 μl 溶液II(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

8.重复步骤7。

9.12,000 rpm离心2 分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,彻底晾干。

特别注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。

10.将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位加入30-50 μl 溶液Ⅲ,室温放置1分钟,12,000 rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。

注意:

1)溶液Ⅲ体积不应小于30 μl,体积过小影响回收率。

2)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤10。

说明书:超纯RNA提取试剂盒

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