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| 新闻速递 |
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| 抗体使用常见技术问题 (FAQs) |
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我应使用浓度多高的一抗？
- 对于我们注明“稀释度根据实验而定”的抗体，较难找到一个起始点。以下图表根据产品的纯度以及抗体将进行的应用提供了一些供使用的起始稀释度。
- 未纯化的抗体在数据表中不会注明浓度。对于大多数全抗血清、培养物上清液或腹水产品，浓度尚未确定。未纯化的抗体制品在具体抗体浓度上差异很大。如果给定的未纯化抗体制品的具体抗体浓度未知，可以把下面的“浓度估值”区作为估算依据。请记住这些稀释度和浓度估值仅推荐用作起始点，有必要根据实验结果调整稀释度。
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组织培养
上清液 |
腹水 |
全抗血清 |
纯化抗体 |
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WB / 斑点杂交 |
1/100 |
1/1000 |
1/500 |
1 ug/ml |
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IHC / ICC |
纯的 - 1/10 |
1/100 |
1/50 - 1/100 |
5 ug/ml |
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EIA / ELISA |
1/1000 |
1/10000 |
1/500 |
0.1 ug/ml |
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FACS / 流式细胞术 |
1/100 |
1/1000 |
1/500 |
1 ug/ml |
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IP |
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1/100 |
1/50-1/100 |
1 - 10 ug/ml |
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浓度估值 |
1 - 3 mg/ml |
5 - 10 mg/ml |
1 - 10 mg/ml |
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我应如何分装抗体？
- 请根据一次实验的常用量进行分装。每等份不应少于 10 µl；每等份的量越少，抗体储液浓度受蒸发和管壁吸附的影响越大。
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我怎样判断一种抗体是否可以从某个未测试的物种中检测出？
- Crnbio不能保证抗体在未测试过的物种中的性能，即使序列比对值很高。决定抗体在其他物种中的结合性的变量有很多。
- 如果没有其他的选择，并且您觉得有必要考虑购买抗体用于未经测试的物种时，我们推荐您进行免疫原与关注蛋白质的序列比对。可以通过在线数据表上的 Swiss-Prot 蛋白质数据库链接查到序列。很多网站提供计算比对百分率的工具。
- 访问 EMBL-EBI 网站
- 输入抗体免疫原序列，将该序列与您想要测试的物种的蛋白质序列进行比对。我们推荐比对值大于 85% 为抗体可进行交叉反应的良好指示。请注意，即使大于 85%，我们仍然不能保证抗体的性能。
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种抗体是否会和其他同工型蛋白质或者来源于同个家族的蛋白质起交叉反应？
- 我们推荐您进行免疫原与所关注亚型或其他蛋白质的序列比对。有很多网站提供计算比对百分率的工具。
- 访问 EMBL-EBI 网站
- 输入抗体免疫原序列，将其与您想要测试的物种的蛋白质序列进行比对。我们推荐比对值大于 85% 为抗体可进行交叉反应的良好指示。因此我们建议，要使交叉反应不发生，则比对百分率应当远低于该值。
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为什么实际的蛋白质印迹条带大小与预期的不同？
- 蛋白质印迹是根据大小分离蛋白质的技术。通常，分子量越小的蛋白质在凝胶中的迁移速率越快。但是迁移速率也受其他因素影响，因此观察到的实际条带大小与预期的可能会有差别。常见因素包括：
- 翻译后修饰 - 例如磷酸化、糖基化等，这些修饰会增加蛋白质的分子量。
- 翻译后剪切 - 例如，很多蛋白质首先合成为前体蛋白，然后剪切形成活性形式，例如半胱天冬酶前体
- 剪接变体 - 通过选择性剪接，可实现同一基因产生不同大小的蛋白质
- 相对电荷 -氨基酸的组成（带电荷的氨基酸与未带电荷的氨基酸各自所占的比例）
- 多聚体 - 例如，蛋白质二聚体。蛋白之间强烈的相互作用会造成条带偏大，但采用还原条件通常可以避免多聚体的形成。
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什么是克隆号？
- 克隆号是指定给单克隆杂交瘤细胞产生的抗体的编号。每个杂交瘤细胞克隆产生单个纯同质型抗体。“单克隆”这个术语适用于单个细胞克隆、单个细胞以及这些细胞的后代。单克隆抗体可以在实验室大量制备。
- 每个克隆号代表用来制造该抗体的克隆自腹水的特定细胞系。因为这些抗体由一个以上宿主生产，所以每个克隆细胞系都有一个唯一的克隆号。克隆号与管形瓶生产相关的批号不同。这些克隆的质量几乎没有差别。
- 克隆也是指由来自亲本的单一体细胞（非生殖细胞）发育而成的个体，代表该亲本的精确复制品。克隆是一群来源于单一祖细胞的细胞。
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